通过ELISA测量SELDI-TOF质谱和钙卫蛋白测定的单体钙粒蛋白作为关节炎中的生物标志物

由de Seny,Dominique Fillet,Marianne; Ribbens,Clio; Maree,Raphael; Meuwis,Marie-Alice; Lutteri,劳伦斯; Chapelle,Jean-Paul; Wehenkel,Louis;路易斯,爱德华; Merville,Marie-Paule; Malaise,Michel背景:SELDI-TOF质谱(MS)是一种高通量蛋白质组学方法,具有识别新型关节炎血清生物标志物的潜力

方法:我们使用SELDI-TOF MS分析来自患有各种炎症形式的患者的血清样本关节炎在不同的Bio-Rad Laboratories ProteinChip阵列(CM10和IMAC-Cu ^ sup 2 + ^)上收集几种蛋白质谱,并进行统计学评估以选择潜在的生物标志物

结果:SELDI-TOF MS分析鉴定了几种钙粒蛋白[S100A8(钙粒蛋白A) ),S100A9(钙粒蛋白B),S100A9 *和S100A12(钙粒蛋白C)],血清淀粉样蛋白A(SAA),SAA des-Arg(SAA-R)和SAA des-Arg / des-Ser(SAA-RS)作为生物标志物,并通过其他技术证实了结果,如免疫印迹,免疫沉淀和纳米LC-MS / MS.S100蛋白均能够显着区分类风湿性关节炎(RA),银屑病关节炎(PsA)患者的样本,和强直患有炎症性肠病的患者的脊椎炎(AS)用作炎症对照(IC)组,而SAA,SAA-R和SAA-RS蛋白则不是,除AS外,4种S100蛋白共同产生于所有病理并与血浆钙卫蛋白浓度显着相关;然而,这些S100蛋白仅与RA和IC患者组中的SAA峰强度相关

在RA中,这些S100蛋白(S100A12除外)与C-反应蛋白,基质金属蛋白酶3和抗血清浓度显着相关

- 环状瓜氨酸肽和疾病活动性评分(DAS ^ sub 28 ^)结论:SELDI-TOF MS技术是分析单体,截短或翻译后修饰形式的关节炎生物标志物(如S100A8)状态的有效方法

,S100A9,S100A12和SAA蛋白SELDITOF MS数据与经典钙卫蛋白ELISA检测结果相关的事实支持了这种新蛋白质组学技术的可靠性(c)2008美国临床化学协会S100蛋白家族的成员是低分子量酸性蛋白质,其特征在于细胞类型特异性产生和2个EF-手钙结合域的存在(1)这些蛋白质,S100A8(也称为骨髓相关蛋白8和钙粒蛋白A),S100A9(骨髓相关蛋白14,钙粒蛋白B)和S100A12(钙粒蛋白C)引起了风湿病学家的特别关注,因为它们是吞噬细胞活化的重要标志物

(2)在这些细胞与活化的内皮细胞相互作用过程中,中性粒细胞和巨噬细胞分泌S100A8和S100A9受到刺激(3,4)S100A8和S100A9蛋白的标志是形成二聚体,异二聚体 - 同二聚体比例约为10:1(5,6)S100A8 /(S100A9)2异三聚体,更好地称为钙卫蛋白,质量为365 kDa,尽管三聚体形成从未通过核磁共振分析证实(5,7)然而,该术语钙卫蛋白继续被用于指代S100A8 / S100A9杂合子,并且ELISA技术几乎专门用于量化疾病状态下的钙卫蛋白状态

最后,四聚体(S100A8 / S100A9)^ sub 2 ^ ha还描述了(8)在炎性条件下,S100A8和S100A9是独立产生的;然而,只有S100A9被发现在急性炎症状态如牙龈炎中,S100A8的产生局限于慢性炎症(9)在许多炎症性风湿性疾病的血清,滑液和滑膜样品中观察到S100A8和S100A9的产量增加

,包括类风湿性关节炎(RA),6型银屑病关节炎(PsA)和强直性脊柱炎(AS)(10-13),以及非风湿性炎症性疾病,如炎症性肠病(IBDs)的个体血清(14) 钙卫蛋白的血清浓度与RA,PsA和AS中与疾病活动相关的许多变量相关,包括肿胀关节数(15),Ritchie指数(10),疾病活动性评分(DAS)等临床变量

^ sub 28 ^)(16),并且诸如C-反应蛋白(CRP)浓度和红细胞沉降率(10,15,16)S100A12等生物学变量主要由炎性激活后的粒细胞产生,并且独立于S100A8和S100A9起作用( 17)其与晚期糖基化终产物(RAGE)受体的相互作用诱导内皮细胞和免疫系统细胞中的促炎信号(18)RA患者的血清,滑膜和滑液中发现S100A12浓度增加( 11,19),PsA(19)和AS(19),以及IBD患者血清(20)血清淀粉样蛋白A(SAA),RA中炎症事件的关键启动子,显示由发炎产生滑膜组织,也是诱导激活RAGE激活(21)鉴定S100和SAA蛋白组作为生物标志物具有挑战性在没有针对S100A8和S100A9单体形式的特异性ELISA和S100A12的市售测试的情况下,我们假设质谱(MS)可能是检测这些蛋白质的可能方法(22)已经通过二维凝胶电泳鉴定S100A8存在于滑膜(13)中,但不存在于血清中(12)二维液相色谱 - 偶联串联MS还成功地用于鉴定来自少数RA患者的血清样品中的几种S100蛋白,包括S100A8(11);然而,这两种蛋白质组学技术的劳动密集型性质只允许对少量生物样品进行研究

因此,我们假设SELDI-TOF MS技术是检测低分子量蛋白质的更合适的蛋白质组学方法(患者和方法患者血液)在他们提供知情同意后,从139名白种人患者中前瞻性地收集了样本

研究方案得到了我们学术医院(CHU de Liege)伦理委员会的批准

从2002年开始,我们将血液样本收集到10-mL血清分离器Vacutainer Tubes(BD)中

医疗系统)我们允许血液在室温下凝结30分钟,并将样品以700g离心10分钟

将所有血清样品等分并立即冷冻于-80℃直至解冻用于SELDITOF MS分析我们定义了5组患者:(a)36名个体(16名健康人和20名骨关节炎患者)的非炎症对照组(NIC),(b) 34例RA患者,(c)22例PsA患者,(d)19例AS患者,和(e)28例IBD患者的IC组(14例患有克罗恩病,14例患有溃疡性结肠炎)患者组的流行病学特征进行了总结在表1中,符合1987年美国风湿病学会标准(26)的RA患者的中位数DAS ^ sub 28 ^ 63(范围35-88),86%的得分> 51(高疾病活动)PsA患者有至少有3个触痛和关节肿胀的活动性疾病AS患者[改良纽约标准(27)]患有活动性疾病,中位数巴氏强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)为6/10(范围,4/10) -10 / 10)IBD患者的诊断根据经验证的标准进行(28)活动性克罗恩病由Harvey-Bradshaw指数定义≥/ 7,活动性溃疡性结肠炎由临床和内窥镜活动征象定义表1患者和对照组的流行病学特征准备和重现蛋白质芯片阵列(Vermillion / Ciphergen Biosystems)的数据在数据补充中的补充方法中有描述,该补充方法随附于本文的在线版本,http:// wwwclinchemorg / content / vol54 / issue6 SELDi-TOF MS数据峰的分析用ProteinChip Biomarker Wizard软件检测(版本30; Bio-Rad实验室)在我们完成各种预处理步骤(24)之后,我们通过2种方法,非参数Mann-Whitney U检验和称为随机森林的机器学习算法(29)分析数据

随机森林是决策树多变量估计每个峰值对2组分类的相关性或相对贡献的分析(29) 后一种方法允许m / z值根据它们与基于信息百分比(信息的百分比)的定量估计来区分2组的相关性进行排序P值S100AS,S100A9,S100A12和SAA通过Western印迹评估(WB)分析简而言之,在12%NuPAGE Bis-Tris聚丙烯酰胺凝胶(Invitrogen)上运行2μL血清,转移,并与抗S100A8单克隆抗体(20μL稀释于10mL; BMA Biomedicals)一起温育

),抗S100A9多克隆抗体(10μL稀释于10mL; Santa Cruz Biotechnology),抗S100A12多克隆抗体(20μL稀释于10mL:Santa Cruz Biotechnology),或抗SAA单克隆抗体(5μL稀释于10mL; Abcam)然后我们与小鼠二抗(2μL稀释于10mL; GE Healthcare / Amersham Biosciences)一起孵育,用兔二抗特异性检测S100A8和SAA

(2μL稀释于10mL; Dako)检测S100A9,或用山羊二抗(2μL)将μL稀释于10mL中;根据制造商的说明书(GE Healthcare / Amersham Biosciences),使用增强的化学发光检测方法检测了S100A12蛋白的圣克鲁斯生物技术

在线数据补充中的补充方法描述了免疫沉淀和1维凝胶电泳方法以及LC SAA的MS / MS鉴定表2用Mann-Whitney U检验评估的选定峰的判别能力,并表示为P值ELISA测试我们进行了抗环瓜氨酸肽2(抗CCP2)抗体的ELISA(截止, 5 000相对单位/ L; Euroimmun),钙卫蛋白(范围,16-100μg/ L; Hyeult生物技术)和基质金属蛋白酶3(MMP-3)(范围,125-20μg/ L; BioSource)(30)按照各自制造商的建议我们使用血清样本,或者在钙卫蛋白检测的情况下,相应的血浆样本相关分析我们使用排名数据来计算Spearman相关系数ents并使用chi ^ sup 2 ^ test来比较定性数据P值SELDI-TOF MS数据的结果分析我们在弱阳离子交换ProteinChip(CM10)阵列上一式两份加载139份血清样品并收集278个光谱我们首先比较光谱对于RA和NIC组,Bio-Rad软件分辨出200个峰在m / z值10 444,10835,12688和13 272处检测到的四个峰具有高度统计学显着性(P值我们还加载了139个血清样本一式三份到固定化金属亲和捕获ProteinChip(IMAC-Cu ^ sup 2 + ^)阵列并收集417个光谱两种统计学方法检测到RA患者中3个峰值显着增加与NIC组相比这些峰值的m / z值为11 438( P S100家族蛋白的鉴定我们通过比较血清样品的WB和SELDITOF MS结果证实了S100A8,S100A9和S100A12蛋白的特性(图2)用8个血清样品进行WB分析(p来自5组患者(NIC,RA,PsA,AS和IC)中的每一组的osilions 1-8)相同的RA样品在每个凝胶上的第9位进行,作为相同血清的阳性对照SELDI-TOF MS谱

在m / z值10 835,13 272和10 444处监测样品,并与相应的WB结果进行比较我们在WB和SELDI分析中获得了每种测试蛋白质的相似谱(图2,AC)

这些数据表明分别为10 835,13 272和10 444 m / z的峰是S100AS,S100A9和S100A12蛋白,根据这两种半定量方法,一些RA,PsA1 AS>和较小程度的IC血清样品是3个S100蛋白阳性我们检测到2个S100A9变体m / z值13 272与氧化形式的S100A9(13 242 Da加32 Da)的计算质量吻合良好,12 688 m / z值可能代表一种称为S100A9 *的S100A9变体,其先前已被紫外线MALDI MS(31)S100A9 *表征,其结果来自tr从氨基酸残基5开始的反应和氨基酸残基6的乙酰化(Ser残基),产生12 691 Da的计算质量

图1在CM10和IMAC-Cu ^ sup 2 + ^ ProteinChip阵列上收集的血清样品的蛋白质质谱来自5名关节炎患者(2名RA,2名AS和1名PsA)和5名NIC个体(A),在CM10阵列上检测到S100A8和S100A12峰,m / z值分别为10 835和10 444 S100A9(m / z = 13 272)和S100A9 *变体(m / z = 12 688)也存在于这些阵列上(B),SAA检测(m / z = 11 680),SAA-R(m / m)在IMAC-Cu ^ sup 2 + ^ ProteinChip阵列上的z = 11 528)和SAA-RS(m / z - 11 438)我们还通过在NP20上从它们的免疫复合物洗脱2种蛋白质来证实S100A8和S100A9蛋白的身份

来自RA患者的血清样品免疫耗竭后的阵列(参见在线数据补充中的图1)我们还在洗脱S100A8后检测到NP20光谱上与S100A12,S100A9 *和S100A9的轻微交叉反应性(S100A8的序列同源性) ,S100A9和S100A12蛋白约为40%)(32)我们无法免疫沉淀S100A12蛋白鉴定SAA蛋白以鉴定负责RA中11 438,11 528和11 680 m / z峰值的蛋白质

在IMAC-Cu ^ sup 2 + ^阵列上的光谱,我们从健康对照个体和RA患者收集血清样品,耗尽白蛋白样品和IgG,并在一维SDS-PAGE凝胶上运行(参见在线数据补充中的图2)银染后,我们从凝胶上的RA样品上切下一条带,表观分子量为11 kDa并进行染色

进行LC-MS / MS分析(参见onJine数据补充中的图2)我们还从健康对照个体的血清样品的相同位置切下凝胶中的另一条带

用胰蛋白酶消化这些条带并通过以下方法分析所得的肽

串联MS(参见在线数据补充中的图2)4个主要胰蛋白酶片段的测序分析(序列覆盖率,51%;总得分,186)显示切除的蛋白质为SAA图2通过WB和SELDI-TOF MS分析S100A8,S100A9,S100A J 2和SAA

对于5组中的每一组,8个血清样品(1-8)的比较两种技术的血清样品(NIC,RA,PsA,AS和IC)用于RA患者的血清样品9在每次WB分析中用作阳性对照以使实验标准化SELDI-TOF MS结果显示在电泳凝胶和光谱图显示的是m / z值接近10 835,13 272,10 4 444和11 680的光谱区域,分别对应于S100A8,S100A9,S100A12和SAA蛋白

我们通过比较WB证实了SAA的特性血清样本的SELDI-TOF MS结果(图2D)每组患者样本(但不是NIC组的样本)在WB分析中为SAA阳性

这一结果证实了m / z处峰的同一性11 680为SAA蛋白质(计算质量,11 682 Da)m / z值为11 438,11 528和11 68因此,我们假设11 438和11 528 m / z峰值代表原始SAA蛋白的2个变体.11 528 m / z值对应于没有第一个N-的SAA蛋白的计算质量

末端Arg残基( - 156 Da);该峰代表SAA-R蛋白(计算质量,11 526 Da)

类似地,11 438 m / z值对应于在N末端截短2个残基Arg和Ser的SAA蛋白质的计算质量( - 243 Da);这个峰代表SAA-RS蛋白(计算质量,11 439 Da)我们还通过免疫检测来自RA患者的血清样品从NP20上的免疫复合物中洗脱它们来证实这些蛋白的同一性(参见在线数据补充中的图1) )患者群体中峰值强度的分布m / z值为10 835(S100A8),12 688(S100A9 *),13 272(S100A9),10444(S100A12),11680(SAA)的峰值的辨别能力,用Mann-Whitney U检验评估在每个关节炎组的样品的光谱中检测到的11528(SAA-R)和11 438(SAA-RS)(表2)

简言之,发现S100蛋白质高度显着有效(P我们接下来分析了7种生物标志物阳性的血清样品的百分比

这些百分比是根据在tn / z值10444(S100A12),10 835(S100A8),13 272(S100A9)测得的峰强度计算的

CM10阵列上的12 688(S100A9 *),m / z值为11 680(SAA) IMAC-Cu ^ sup 2 + ^阵列上的11 528(SAA-R)和11 438(SAA-RS)峰值强度值被平均

截止值被定义为相应m / z值的最高峰值强度在NIC血清样品的光谱中 同样,计算钙卫蛋白阳性血浆样本的百分比,截止值定义为NIC组中观察到的最高钙卫蛋白浓度增加的S100蛋白峰强度和增加的钙卫蛋白浓度检测率分别为43%-89%和33%-56%

关节炎血清样本分别和15%的34%和33%的IC患者(表3)4种S100蛋白的阳性率显着相关[chi ^ sup 2 ^(9)= 84; P在RA,PsA,AS和IC患者组中,各种S100蛋白,SAA,钙卫蛋白和其他评估变量之间存在统计学上显着的相关性(表4)简而言之,4种S100蛋白的值均高度相关且与所有患者组血浆钙卫蛋白浓度相关的S100蛋白峰也与SAA峰相关,但仅在RA组和IC组中,在RA组中,S100蛋白峰和钙卫蛋白浓度与CRP,log MMP-3相关

和抗CCP2抗体(S100A12除外)血清浓度和DAS ^ sub 28 ^,但与关节肿胀或肿胀的数量无关(数据未显示)产生S100蛋白或钙卫蛋白的RA患者的病程长于S100阴性和钙卫蛋白阴性患者(132个月vs 17个月和117个月vs 16个月; P表4 S100蛋白,SAA和血清临床变量的相关系数从RA,PsA,AS和IC患者收集的样本SAA与所有患者组的CRP血清浓度相关,并且与RA患者组中的DAS28和对数MMP-3血清浓度相关

血浆钙卫蛋白浓度与log MMP-相关RA,PsA和IC患者组中的3种血清浓度以及RA,AS和IC患者组中的SAA蛋白质讨论在本研究中,我们使用SELDI-TOF MS方法检测S100A8,S100A9,S100A9变体(S100A9 *),S100A12,SAA,SAA-R和SAA-RS,我们通过WB,免疫耗竭和nanoLC-MS / MS鉴定了这些蛋白质

在之前的研究中,我们已经通过WB分析证明了峰值在一个RA血清样品中,m / z 10 835为S100A8(24)我们在本研究中证实了该峰的特性,不仅在来自RA患者的血清样品中,而且在来自患有其他炎性疾病的患者的样品中也证实了该质量

鉴定为S100A9 *的峰的蛋白质是非常同意的与截短形式的S100A9相比,这是一种已经通过紫外线MALDI MS检测人体血沉棕黄层(31),头颈部皮肤鳞状细胞癌(33)和儿童囊性纤维化患者中性粒细胞(34)的变异体

)之前已在肾癌中鉴定出SAA变体,但在关节炎或IBD患者中未发现SELDI-TOF MS因此是用于检测此类关节炎生物标志物的非常有效的技术,如单体,截短或翻译后修饰的S100和SAA蛋白

形式通过ELISA测量的S100蛋白的峰强度和钙卫蛋白血浆浓度之间的高度显着的线性相关性证实了这种新的蛋白质组学方法用于研究这些炎症相关蛋白的可靠性我们得出结论,这些蛋白质在每个中被上调

我们研究的疾病是因为S100蛋白和钙卫蛋白在质量上都是相关的,如强浓缩所示WB阳性和SELDI-TOF MS阳性之间的关系,并且定量地,如峰强度的显着线性相关性所示

此外,S100A8,SIOOA9,S100A9 *和S100A12的峰强度以及钙卫蛋白浓度与之相关

反映RA的生物学和临床活性的变量,如DAS ^ sub 28 ^和CRP,MMP-3和抗CCP2抗体的血清浓度

这些结果为蛋白质组检测钙调蛋白的临床相关性提供了强有力的支持

-CCP2抗体也可能与放射学上观察到的RA结构损伤有关,因为已证明抗CCP抗体是关节损伤的独立预测因子(35),钙卫蛋白的血清浓度也是如此(16) 我们无法直接解决这个问题,因为我们没有进行过X射线成像研究;然而,我们确实发现SlOO蛋白或钙卫蛋白浓度增加的患者具有显着更长的疾病持续时间,预计与更大的放射学可检测的损伤相关我们观察到RA患者与PsA和AS患者之间的差异,因为4个S100蛋白是与RA患者的CRP和MMP-3浓度显着相关,但在其他2组患者中没有显着相关我们将这一发现归因于AS和PsA患者的CRP和MMP-3浓度异常低于RA患者(30) IC组中4种S100蛋白与MMP-3血清浓度之间的强相关性与发炎肠组织中两种蛋白质的大量产生结果一致(36)我们还观察到4种S100蛋白区分关节炎非关节炎症状(NIC和IC组),而SAA模式区分炎性疾病(RA,PsA和IC g来自非炎症性疾病(NIC组)同样令人感兴趣的是,在关节炎组中,4种S100蛋白的峰强度与RA组中的SAA峰强度相关,但在AS和PsA组中没有

这些结果模仿了什么我们已经观察到CRP和MMP-3变量我们因此得出结论,关节炎过程与RA中的炎症过程相关,其中急性期反应很好,但在AS或PsA中没有,因此,这一结论表明,RA患者炎症部位的调节途径和S100和SAA蛋白的局部产生模式与AS和PsA患者不同(37)SELDI-TOF MS是一种独特的区分方法

来自多聚体形式的S100单体和用于检测SAA变体的单体,这是目前的ELISAs无法识别各种SAA形式可能很重要,因为它们可能有所不同病理生理学作用最近通过SELDI-TOF分析囊性纤维化患者中几种截短形式的S100A8和S100A12表明C末端截短影响蛋白质功能(34)已发现S100A8和S100A12,但不是钙卫蛋白的存在

是羊膜腔内炎症的特征(22),并且已经描述了具有不同特性的SAA变体,例如对基质金属蛋白酶消化的差异易感性(38)

这些发现证明了开发新蛋白质组学方法的相关性,这些方法对于研究其中的蛋白质具有足够的强大作用

修饰或单体形式总之,我们使用SELDI-TOF MS技术鉴定几种与疾病活动相关的几种生物或临床变量相关的关节炎生物标志物我们无法解决这些生物标志物在关节炎病理生理学中的功能作用,因为我们选择了血清样本具有各自疾病特征的个体,而不是来自每种疾病不同阶段的个体的研究利用SELDI-TOF MS技术评估疾病阶段对这些生物标志物的影响的研究可以阐明这个问题拨款/资助支持:这项研究得到了国家科学研究基金会(比利时FNRS)和比利时CHU de Liege的科学基金会(FIRS)的支持

金融披露:没有宣布致谢:作者感谢Aline Desoroux和Gael Cobraiville由于他们的专业技术支持,MF是研究助理,EL和MPM是FNRS(国家科学研究基金)的高级研究员6非标准缩写:RA,类风湿性关节炎; PsA,银屑病关节炎; AS,强直性脊柱炎; IBD,炎症性肠病; DAS28,疾病活动评分; CRP,C-反应蛋白; RAGE,高级gtycation终产品的受体; SAA,血清淀粉样蛋白A;质谱,质谱; IC,炎症控制; NIC,非炎症控制; BASDAI,Bath强直性脊柱炎疾病活动指数; WB,western blot抗CCP2,抗环瓜氨酸peptkie 2; MMP-3,基质金属蛋白酶3; CMIO,弱阳离子交换蛋白芯片;信息百分比,信息百分比; IMAC-Cu ^ sup 2 + ^ 固定化金属亲和捕获ProteinChip; SAA-R,SAA des-Arg; SAA-RS,SAA des-Arg / des-Ser参考文献1 Foell D,Wittkowski H,Vogl T,Roth J S100蛋白在吞噬细胞中表达:一组新的损伤相关分子模式分子J Leukoc Biol 2007; 81:28- 37 2 De Rycke L,Baeten D,Foell D,Kruithof E,Veys EM,Roth J,et al

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发病幼年型类风湿性关节炎Arthritis Rheum 2000; 43:628-37 4 Sunahori K,Yamamura M,Yamana J,Takasugi K,Kawashima M,Yamamoto H,et al S100A8 / A9异二聚体通过激活核因子扩增巨噬细胞产生促炎性细胞因子kappa B和p38 mitog类风湿性关节炎中的en-活化蛋白激酶Arthritis Res Ther 2006; 8:R69 5 Hunter MJ,Chazin WJ S100 EF-手蛋白的高水平表达和二聚体表征,迁移抑制因子相关蛋白8和14 J Biol Chem 1998; 273:12427-35 6 Cropper C,Huang X,Roth J,Sorg C,Nacken W双杂交系统对MRP8-MRPH蛋白质 - 蛋白质相互作用的分析表明S100蛋白质C末端结构域的突出作用二聚体形成J Biol Chem 1999; 274:183-8 7 Strupat K,Rogniaux H,Van Dorsselaer A,Roth J,Vogl T通过电喷雾电离 - 质谱分析证实钙诱导的非共价连接的MRPS和MRP14四聚体J Am Soc Mass Spectrom 2000; 11:780- 8 8 Komdorfer IP,Brueckner F,Skerra A人类(S100A8 / S100A9)^ sub 2 ^异四聚体钙卫蛋白的晶体结构说明了相互作用的α-螺旋的构象变化如何决定两种EF-手蛋白的特异性结合,J Mol Biol 2007; 370:887-98 9 Zwadlo G,Bruggen J,Gerhards G,Schlegel R,Sorg C两种与骨髓细胞分化特定阶段相关的钙结合蛋白由炎症组织中的巨噬细胞亚群表达Clin Exp Immunol 1988 ; 72:510-5 10 Kane D,Roth J,Frosch M,Vogl T,Bresnihan B,FitzGerald O银屑病关节炎中骨髓相关蛋白的血管周围滑膜表达增加Arthritis Rheum 2003; 48:1676-85 11 Liao H, Wu J,Kuhn E Chin W,Chang B,Jones MD,等利用质谱法鉴定类风湿性关节炎患者滑液和血清中疾病严重程度的蛋白质生物标志物Arthritis Rheum 2004; 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